Composition qualitative et quantitative

Immunoglobuline antirabique fluorescente avec un titre d'activité ≥ 1:8.

Forme pharmaceutique

Lyophilisat.

Action immunobiologique

Utilisé pour le diagnostic in vitro de la rage.

Espèces animales

Les immunoglobulines sont destinées à la détection de l'antigène du virus de la rage dans les échantillons pathologiques de toutes les espèces animales.

Utilisation

Le kit est utilisé pour le diagnostic de la rage par immunofluorescence (IF).

Contre-indications

Ne pas analyser les échantillons de cerveau ayant été conservés avec du glycérol, de l'alcool éthylique, du formol ou d'autres substances provoquant la dénaturation et la destruction des antigènes du virus de la rage ou susceptibles de provoquer un fond de fluorescence non spécifique supplémentaire.

Précautions particulières d'emploi

Le kit ne doit pas être utilisé en cas de rupture des flacons, de présence d'impuretés, de moisissure, de flocons, de sédiments ou de changement de couleur.

Utilisation pendant la grossesse, l'allaitement et la période de ponte

Aucune.

Interactions avec d'autres produits et autres formes d'interaction

Perd son activité en cas d'exposition aux rayons directs du soleil.

Posologie et mode d'administration

Utilisé pour le diagnostic in vitro conformément à la notice.

Effets indésirables

Aucun.

Surdosage

Le produit n'est pas destiné à être utilisé chez les animaux.

Période d'élimination

Aucune.

Précautions particulières à l'intention des personnes et du personnel soignant qui administrent des produits de protection aux animaux

Seul le personnel vacciné est autorisé à effectuer les tests de diagnostic de la rage.

Incompatibilités

Aucune n'a été identifiée.

Durée de conservation

24 mois. Le produit doit être conservé dans un endroit sombre à une température comprise entre 2 et 8 °C.

Conditions de conservation

Une fois dissoute, la globuline fluorescente peut être conservée à une température comprise entre 2 et 8 °C pendant 24 heures au maximum, ou à l'état congelé à une température ne dépassant pas -12 °C pendant 14 jours. Ne pas exposer à la lumière. Conserver hors de portée des enfants.

Présentation

Le produit est conditionné en flacons en verre de 0,5 à 2,0 ml, fermés par des bouchons en caoutchouc et recouverts de capuchons en aluminium, ou en ampoules, qui sont emballées dans des boîtes en carton ou des blisters en plastique.

Précautions particulières à prendre lors de la manipulation du produit non utilisé

Les matières biologiques doivent être manipulées comme des substances potentiellement dangereuses, y compris tous les échantillons prélevés sur le terrain.

Informations complémentaires

Si le produit ne répond pas aux exigences de la notice ou si des complications surviennent, l'utilisation de ce lot doit être immédiatement interrompue et signalée à l'Institut national de contrôle scientifique des biotechnologies et des souches de micro-organismes (DNKIBSHM) ainsi qu'au fournisseur (fabricant). Parallèlement à l'envoi d'un courrier au DNKIBSHM, il convient d'expédier, conformément aux « Instructions relatives à la procédure de réclamation concernant les préparations biologiques destinées à être utilisées en médecine vétérinaire » du 03/06/98 n° 2, un kit de diagnostic de cette série de préparations à l'adresse suivante : 03151, ville de Kiev, rue Donetska, 30, DNKIBSHM.

MÉTHODE DE RÉALISATION DU TEST D'IMUNOFUORESCENCE 

Matériel

Microscope à fluorescence, lames de microscope, pipettes graduées de 1, 2, 5 et 10 ml, fioles graduées, coupelles bactériologiques, diméthylphtalate, acétone de qualité XCH ou CHDA, tampon phosphate-saline (FSB) pH 7,2-7,4, «RABITEST-FAT» globuline antirabique fluorescente, échantillons positifs et négatifs.

Préparation du tampon phosphate-sodium pH 7,2-7,4

Le FSB est préparé selon la formule suivante : phosphate de sodium dihydraté anhydre — 1,25 g, phosphate de potassium monohydraté — 0,272 g, chlorure de sodium — 8,5 g, eau distillée — jusqu'à 1 000 cm³.

Préparation du matériel à examiner

Pour réaliser les analyses, on prépare des frottis ou des empreintes provenant de différentes zones du cerveau frais ou fraîchement congelé (préalablement décongelé) de l'animal (cornes de l'ammoniac, cervelet, méninges, cortex des grands hémisphères) à l'aide de lames préalablement dégraissées. On prépare au moins deux frottis ou imprégnats pour chaque partie du cerveau. Il est interdit d'utiliser pour l'étude des échantillons de cerveau d'animaux en état de décomposition, conservés dans du glycérol, fixés à l'alcool méthylique ou éthylique, au formol ou à d'autres substances favorisant l'apparition d'une fluorescence non spécifique.

Pour la préparation des frottis, des morceaux de cerveau d'un poids de 0,5 à 1,0 g provenant des zones susmentionnées du cerveau sont broyés dans un mortier jusqu'à l'obtention d'une masse homogène, à partir de laquelle sont ensuite préparés des frottis fins sur des lames de microscope. Pour réaliser des empreintes à partir des zones cérébrales indiquées, on découpe à l'aide de ciseaux des morceaux de tissu d'une taille comprise entre 5 mm² et 10 mm² et on les place sur du papier filtre plié en 4 à 6 couches afin d'éliminer l'excès d'humidité. On effleure la surface de la coupe 3 à 4 fois avec une lame, en exerçant une légère pression, jusqu’à l’obtention d’une fine empreinte sur la lame.

Pour la préparation des échantillons témoins négatifs, on utilise des frottis ou des empreintes provenant du cerveau de souris saines (non infectées et non vaccinées contre la rage). Les échantillons témoins positifs sont préparés à partir de la cervelle de souris infectées par la souche de référence CVS du virus de la rage, ou à partir de matériel positif préalablement testé. La cervelle des souris infectées est prélevée au stade de l'agonie.

Après préparation, les frottis ou les empreintes sont séchés à l'air libre à température ambiante, puis fixés dans de l'acétone à une température de -20 °C pendant 30 à 60 minutes.

Réalisation de la réaction d'immunofluorescence

La globuline antirabique fluorescente lyophilisée « RABITEST-FAT » est reconstituée avec de l'eau distillée jusqu'au volume initial indiqué sur l'étiquette. Préparez ensuite la dilution de travail de la globuline, indiquée sur l'étiquette, en ajoutant la quantité nécessaire de 0,01 M de FSB. Pour l'examen, utilisez des frottis ou des empreintes sur lesquels vous appliquez la dilution de travail de la globuline antirabique fluorescente « RABITEST-FAT ». La solution de globulines est répartie uniformément sur toute la surface de la préparation à l'aide d'une pipette, à raison de (0,1 ± 0,01) ml par préparation. Les préparations sont ensuite placées dans une chambre humide et maintenues dans un thermostat pendant 30 minutes à une température de 37 °C. On colorera simultanément les préparations témoins. Au bout de 30 minutes, on rincera les globulines fluorescentes à l'eau distillée, puis on lavera les lames avec les frottis dans une solution tampon de phosphate (PTP) de pH 7,2-7,4, trois fois pendant 10 minutes, en changeant la solution à chaque fois.

Ensuite, les préparations colorées sont rincées à l'eau distillée, séchées à l'air libre et examinées en immersion sous un microscope à fluorescence dans le spectre bleu-vert. On utilise pour cela de l'huile non fluorescente ou de la glycérine pour la microscopie à fluorescence. Lors de l'examen des préparations, les tissus cérébraux brillent d'une couleur terne, grisâtre-jaune, verdâtre ou brun foncé. La fluorescence de l'antigène du virus de la rage est détectée dans les neurones et en dehors de ceux-ci sous la forme de granules vifs de couleur jaune-vert ou vert émeraude, de formes et de tailles variées.

Le diagnostic de rage est considéré comme établi si au moins 10 granules fluorescents typiques ont été détectés dans plusieurs champs de vision du microscope, à condition qu'il n'y ait pas de fluorescence spécifique dans les préparations témoins négatives et que des granules typiques soient présents dans les préparations témoins positives.