РАБИТЕСТ-РИФ

КАЧЕСТВЕННЫЙ И КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ СОСТАВ

Флуоресцирующий антирабический иммуноглобулин с рабочим титром ≥ 1:8.

ФармацевтичЕСКаЯ форма

Лиофилизат.

ИМмунобИологИчЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ

Используется для диагностики бешенства in vitro.

Вид ЖИВОТНЫХ

Глобулины предназначены для выявления антигена вируса бешенства в патологическом материале всех видов животных.

ПРИМЕНЕНИЕ

Набор применяют для диагностики бешенства в реакции иммунофлуоресценции (РИФ).

ПротиВОпоказанИя

Не исследуют пробы мозга, которые подвергались консервации глицерином, этиловым спиртом, формалином или другими веществами, которые вызывают денатурацию и разрушение антигенов вируса бешенства или могут вызвать дополнительный неспецифический фон свечения.

ОсобЫЕ ПРЕДОстереженИя при ПРИМЕНЕНИИ

Набор не подлежит применению в случае нарушения целостности флаконов, наличия посторонних примесей, плесени, хлопьев, осадка и изменения цвета.

ПРИМЕНЕНИЕ ПРИ БЕРЕМЕННОСТИ, лактацИИ, ЯЙЦЕНОСКОСТИ

Не существует.

Взаимодействие с другими средствами и другие формы Взаимодействия

При взаимодействии с прямыми солнечными лучами теряет активность.

Дозы и способы введения

Применяется для диагностики in vitro в соответствии с листком-вкладышем.

Побочное действие

Не существует.

ПередозИРОВКА

Препарат животным не применяют.

ПерИод вЫведенИя

Не существует.

СпецИальнЫЕ ПРЕДОстереженИя для ЛИЦ И обслуЖИвАюЩЕго персоналА, котОРЫЕ вводят СРЕДСТВА заЩИТЫ ЖИВОТНЫМ

К проведению работы по диагностике бешенства допускается только привитый персонал.

ФормЫ НЕСОВМЕСТИМОСТИ

Не выявлены.

срок годности

24 месяца. Препарат хранить в темном месте при температуре от 2 до 8°С.

условия хранения

Флуоресцирующий глобулин после растворения допускается хранить при температуре от 2 до 8°С не более 24 часов, или в замороженном состоянии при температуре не выше минус 12°С – до 14 суток. Беречь от света. Хранить в местах, недоступных для детей.

Форма выпуска

Препарат фасуют по 0,5-2,0 мл в стеклянные флаконы, закрытые резиновыми пробками и закатанные алюминиевыми колпачками, или в ампулы, которые упаковывают в картонные коробки или полимерные блистеры.

Особые меры безопасности при обращении с неиспользованным препаратом

С биологическими материалами следует обращаться, как с потенциально опасными, включая все полевые образцы.

дополнительная информация

Если препарат не отвечает требованиям листка-вкладыша или возникли осложнения, применение этой серии немедленно прекращают и сообщают в Государственный научно-контрольный институт биотехнологии и штаммов микроорганизмов (ГНКИБШМ) и поставщика (производителя). Одновременно с посланником в ГНКИБШМ направляют, согласно «Указаниям о порядке предъявления рекламаций на биологические препараты, предназначенные для применения в ветеринарной медицине» от 03.06.98 №2 диагностический набор этой серии препарата по адресу: 03151, г. Киев, ул. Донецкая, 30, ГНКИБШМ.

МЕТОДИКА ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНЦИИ

Материалы

Микроскоп люминесцентный, стекла предметные, пипетки мерные на 1; 2; 5; 10 мл, колбы градуированные, чашки бактериологические, диметилфталат, ацетон квалификации ХЧ или ЧДА, фосфатно-солевой буфер (ФСБ) pH 7,2-7,4, «РАБИТЕСТ-РИФ (RABITEST-FAT)» глобулин антирабический флуоресцирующий, положительные и отрицательные образцы.

Приготовление фосфатно-солевого буфера pH 7,2-7,4

ФСБ готовят по такой прописи: фосфат натрия двузамещенный безводный – 1,25 г, фосфат калия однозамещенный – 0,272 г, хлористый натрий – 8,5 г, вода дистиллированная – до 1000 см3.

Подготовка исследуемого материала

Для проведения исследований готовят мазки или отпечатки с различных участков свежего или свежезамороженного (который предварительно оттаивают) головного мозга животного (аммониевые рога, мозжечок, продолговатый мозг, кора больших полушарий) с использованием предварительно обезжиренных предметных стекол. С каждого участка мозга готовят не менее двух мазков или отпечатков. Нельзя использовать для исследования пробы головного мозга животных в стадии загнивания, консервированные глицерином, фиксированные метиловым или этиловым спиртом, формалином или другими веществами, способствующими возникновению неспецифической флуоресценции.

Для приготовления мазков кусочки мозга массой 0,5-1,0 г из вышеупомянутых участков головного мозга растирают в ступке до образования гомогенной массы, из которой в дальнейшем готовят тонкие мазки на предметных стеклах. Для изготовления отпечатков из указанных участков мозга ножницами вырезают кусочки ткани размером от 5 мм2 до 10 мм2 и кладут их на фильтровальную бумагу, сложенную в 4-6 слоев для удаления лишней влаги. К поверхности среза 3-4 раза касаются предметным стеклом, едва надавливая на него, до получения на предметном стекле тонкого отпечатка.

Для изготовления отрицательных контрольных препаратов используют мазки или отпечатки из мозга здоровых мышей (неинфицированных и невакцинированных против бешенства). Положительные контрольные образцы готовят из мозга мышей, инфицированных референс-штаммом CVS вируса бешенства, или из предварительно исследованного положительного материала. Мозг инфицированных мышей отбирают в стадии агонии.

После приготовления мазки или отпечатки высушивают на воздухе при комнатной температуре, фиксируют в ацетоне при температуре минус 20°С в течение 30-60 минут.

Постановка реакции иммунофлуоресценции

Лиофилизированный «РАБИТЕСТ-РИФ (RABITEST-FAT)» глобулин антирабический флуоресцирующий восстанавливают дистиллированной водой до первоначального объема, указанного на этикетке. В дальнейшем готовят рабочее разведение глобулина, указанное на этикетке, путем добавления необходимого количества 0,01М ФСБ. Для исследования используют мазки или отпечатки, на которые наносят рабочее разведение «РАБИТЕСТ-РИФ (RABITEST-FAT)», глобулин антирабический флуоресцирующий. Раствор глобулинов распределяют равномерно по всей поверхности препарата с помощью пипетки в количестве (0,1 ± 0,01) мл на один препарат. В дальнейшем препараты помещают во влажную камеру и выдерживают в термостате в течение 30 мин. при температуре 37°С. Одновременно красят контрольные препараты. Через 30 минут флуоресцирующие глобулины смывают дистиллированной водой, стекла с мазками отмывают в ФСБ с pH 7,2-7,4 трижды по 10 минут, со сменой ФСБ.

После этого окрашенные препараты ополаскивают дистиллированной водой, просушивают на воздухе и исследуют под иммерсией в люминесцентном микроскопе в сине-зеленом спектре лучей. При этом используют нефлуоресцирующее масло или глицерин для флуоресцентной микроскопии. При просмотре препаратов ткани мозга светятся тусклым, серовато-желтым, зеленоватым или темно-коричневым цветом. Свечение антигена вируса бешенства обнаруживают в нейронах и вне их в виде ярких желтовато-зеленых или ярко-зеленых изумрудных гранул различной формы и размера.

Диагноз «бешенство» считают установленным, если в нескольких полях зрения микроскопа было обнаружено не менее 10 типичных флуоресцирующих гранул при отсутствии специфического свечения в контрольных отрицательных препаратах и при наличии типичных гранул в контрольных положительных препаратах.