РАБИТЕСТ-РИФ








КАЧЕСТВЕННЫЙ И КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ СОСТАВ
Флуоресцирующий антирабический иммуноглобулин с рабочим титром ≥ 1:8.
ФармацевтичЕСКаЯ форма
Лиофилизат.
ИМмунобИологИчЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ
Используется для диагностики бешенства in vitro.
Вид ЖИВОТНЫХ
Глобулины предназначены для выявления антигена вируса бешенства в патологическом материале всех видов животных.
ПРИМЕНЕНИЕ
Набор применяют для диагностики бешенства в реакции иммунофлуоресценции (РИФ).
ПротиВОпоказанИя
Не исследуют пробы мозга, которые подвергались консервации глицерином, этиловым спиртом, формалином или другими веществами, которые вызывают денатурацию и разрушение антигенов вируса бешенства или могут вызвать дополнительный неспецифический фон свечения.
ОсобЫЕ ПРЕДОстереженИя при ПРИМЕНЕНИИ
Набор не подлежит применению в случае нарушения целостности флаконов, наличия посторонних примесей, плесени, хлопьев, осадка и изменения цвета.
ПРИМЕНЕНИЕ ПРИ БЕРЕМЕННОСТИ, лактацИИ, ЯЙЦЕНОСКОСТИ
Не существует.
Взаимодействие с другими средствами и другие формы Взаимодействия
При взаимодействии с прямыми солнечными лучами теряет активность.
Дозы и способы введения
Применяется для диагностики in vitro в соответствии с листком-вкладышем.
Побочное действие
Не существует.
ПередозИРОВКА
Препарат животным не применяют.
ПерИод вЫведенИя
Не существует.
СпецИальнЫЕ ПРЕДОстереженИя для ЛИЦ И обслуЖИвАюЩЕго персоналА, котОРЫЕ вводят СРЕДСТВА заЩИТЫ ЖИВОТНЫМ
К проведению работы по диагностике бешенства допускается только привитый персонал.
ФормЫ НЕСОВМЕСТИМОСТИ
Не выявлены.
срок годности
24 месяца. Препарат хранить в темном месте при температуре от 2 до 8°С.
условия хранения
Флуоресцирующий глобулин после растворения допускается хранить при температуре от 2 до 8°С не более 24 часов, или в замороженном состоянии при температуре не выше минус 12°С – до 14 суток. Беречь от света. Хранить в местах, недоступных для детей.
Форма выпуска
Препарат фасуют по 0,5-2,0 мл в стеклянные флаконы, закрытые резиновыми пробками и закатанные алюминиевыми колпачками, или в ампулы, которые упаковывают в картонные коробки или полимерные блистеры.
Особые меры безопасности при обращении с неиспользованным препаратом
С биологическими материалами следует обращаться, как с потенциально опасными, включая все полевые образцы.
дополнительная информация
Если препарат не отвечает требованиям листка-вкладыша или возникли осложнения, применение этой серии немедленно прекращают и сообщают в Государственный научно-контрольный институт биотехнологии и штаммов микроорганизмов (ГНКИБШМ) и поставщика (производителя). Одновременно с посланником в ГНКИБШМ направляют, согласно «Указаниям о порядке предъявления рекламаций на биологические препараты, предназначенные для применения в ветеринарной медицине» от 03.06.98 №2 диагностический набор этой серии препарата по адресу: 03151, г. Киев, ул. Донецкая, 30, ГНКИБШМ.
МЕТОДИКА ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНЦИИ
Материалы
Микроскоп люминесцентный, стекла предметные, пипетки мерные на 1; 2; 5; 10 мл, колбы градуированные, чашки бактериологические, диметилфталат, ацетон квалификации ХЧ или ЧДА, фосфатно-солевой буфер (ФСБ) pH 7,2-7,4, «РАБИТЕСТ-РИФ (RABITEST-FAT)» глобулин антирабический флуоресцирующий, положительные и отрицательные образцы.
Приготовление фосфатно-солевого буфера pH 7,2-7,4
ФСБ готовят по такой прописи: фосфат натрия двузамещенный безводный – 1,25 г, фосфат калия однозамещенный – 0,272 г, хлористый натрий – 8,5 г, вода дистиллированная – до 1000 см3.
Подготовка исследуемого материала
Для проведения исследований готовят мазки или отпечатки с различных участков свежего или свежезамороженного (который предварительно оттаивают) головного мозга животного (аммониевые рога, мозжечок, продолговатый мозг, кора больших полушарий) с использованием предварительно обезжиренных предметных стекол. С каждого участка мозга готовят не менее двух мазков или отпечатков. Нельзя использовать для исследования пробы головного мозга животных в стадии загнивания, консервированные глицерином, фиксированные метиловым или этиловым спиртом, формалином или другими веществами, способствующими возникновению неспецифической флуоресценции.
Для приготовления мазков кусочки мозга массой 0,5-1,0 г из вышеупомянутых участков головного мозга растирают в ступке до образования гомогенной массы, из которой в дальнейшем готовят тонкие мазки на предметных стеклах. Для изготовления отпечатков из указанных участков мозга ножницами вырезают кусочки ткани размером от 5 мм2 до 10 мм2 и кладут их на фильтровальную бумагу, сложенную в 4-6 слоев для удаления лишней влаги. К поверхности среза 3-4 раза касаются предметным стеклом, едва надавливая на него, до получения на предметном стекле тонкого отпечатка.
Для изготовления отрицательных контрольных препаратов используют мазки или отпечатки из мозга здоровых мышей (неинфицированных и невакцинированных против бешенства). Положительные контрольные образцы готовят из мозга мышей, инфицированных референс-штаммом CVS вируса бешенства, или из предварительно исследованного положительного материала. Мозг инфицированных мышей отбирают в стадии агонии.
После приготовления мазки или отпечатки высушивают на воздухе при комнатной температуре, фиксируют в ацетоне при температуре минус 20°С в течение 30-60 минут.
Постановка реакции иммунофлуоресценции
Лиофилизированный «РАБИТЕСТ-РИФ (RABITEST-FAT)» глобулин антирабический флуоресцирующий восстанавливают дистиллированной водой до первоначального объема, указанного на этикетке. В дальнейшем готовят рабочее разведение глобулина, указанное на этикетке, путем добавления необходимого количества 0,01М ФСБ. Для исследования используют мазки или отпечатки, на которые наносят рабочее разведение «РАБИТЕСТ-РИФ (RABITEST-FAT)», глобулин антирабический флуоресцирующий. Раствор глобулинов распределяют равномерно по всей поверхности препарата с помощью пипетки в количестве (0,1 ± 0,01) мл на один препарат. В дальнейшем препараты помещают во влажную камеру и выдерживают в термостате в течение 30 мин. при температуре 37°С. Одновременно красят контрольные препараты. Через 30 минут флуоресцирующие глобулины смывают дистиллированной водой, стекла с мазками отмывают в ФСБ с pH 7,2-7,4 трижды по 10 минут, со сменой ФСБ.
После этого окрашенные препараты ополаскивают дистиллированной водой, просушивают на воздухе и исследуют под иммерсией в люминесцентном микроскопе в сине-зеленом спектре лучей. При этом используют нефлуоресцирующее масло или глицерин для флуоресцентной микроскопии. При просмотре препаратов ткани мозга светятся тусклым, серовато-желтым, зеленоватым или темно-коричневым цветом. Свечение антигена вируса бешенства обнаруживают в нейронах и вне их в виде ярких желтовато-зеленых или ярко-зеленых изумрудных гранул различной формы и размера.
Диагноз «бешенство» считают установленным, если в нескольких полях зрения микроскопа было обнаружено не менее 10 типичных флуоресцирующих гранул при отсутствии специфического свечения в контрольных отрицательных препаратах и при наличии типичных гранул в контрольных положительных препаратах.