Эффективность применения препарата на основе бутафосфана, витаминов группы В и L-карнитина при лечении лошадей

Эффективность применения препарата на основе бутафосфана, витаминов группы В и L-карнитина при лечении лошадей

Важной особенностью всех живых организмов, приобретенной в процессе эволюции, является способность адаптироваться к различным внешним воздействиям и изменениям окружающей среды, поддерживать гомеостаз и регуляционные процессы в органах, системах и организме в целом. Современные методы интенсивного выращивания животных в условиях хозяйств различного типа с использованием высокопродуктивных пород и внедрение промышленной технологии содержания существенно отличаются от традиционных методов выращивания. При этом часто физиологические возможности организма животных не в состоянии меняться так быстро, как того требуют условия промышленного содержания, что приводит к возникновению стрессового состояния. Животное в состоянии стресса заметно теряет вес, слабеет, у него снижается сопротивляемость к заболеваниям, нарушается воспроизводительная способность, происходят изменения в метаболизме, в частности теряется энергия, которая могла бы использоваться для роста и развития организма. Установлено, что в результате стресса у животных животноводческие предприятия несут значительные экономические потери (Hrabovskyi, 2012; Suprun, 2012; Martyshuk et al., 2019; 2020; Slivinska et al., 2020; Grymak et al., 2020; Leskiv et al., 2021; Nazaruk et al.,2021).

Имеющийся на рынке Украины ассортимент ветеринарных препаратов и кормовых добавок активно пополняется новыми образцами отечественного и импортного производства. На сегодня большинство отечественных производителей ветеринарных препаратов прибегает к производству генерических препаратов (препаратов-аналогов) различных фармацевтических групп. Для повышения устойчивости к стрессовым ситуациям, профилактики заболеваний, повышения резистентности, сохранности и продуктивности сельскохозяйственных животных, ветеринарными специалистами широко используются ветеринарные препараты и биологически активные кормовые добавки (Zhyla et al., 2015; Chalmeh et al., 2020).

Соблюдение системы доклинических и клинических исследований ветеринарных лекарственных средств, отвечающей международным требованиям, является основным залогом разработки эффективных, безопасных и конкурентоспособных препаратов (Saliy et al., 2020). Актуальной является оценка влияния препарата на метаболические процессы в организме животного с гематологическими, биохимическими и иммунологическими показателями, объективно характеризируют его безопасность, клиническое течение заболевания и выздоровление, проявление побочных эффектов и возникновение рецидивов (VICH GL9, 2000; Kotsiumbaset al., 2006; VICH GL43, 2008; Zhyla, 2011; Kotsiumbaset al., 2013; Zhyla et al., 2016).

Препарат L-Цин, раствор для инъекций, является лекарственным средством отечественного производства (РС: AB-09278-01-19), действие которого обусловлено рецептурной комбинацией действующих веществ, а именно: бутафосфаном, витаминами группы В (витамином B12, витамином В3) и L- карнитином, ATC vet классификационный код продукта QA12C. Другие минеральные добавки, QA12CX91 Бутафосфан.

Бутафосфан — это органическое соединение фосфора, обнаруженное специалистами компании «Байер» в 1926 году, влияет на ряд ассимиляционных процессов в организме животных, стимулирует синтез протеинов, ускоряет рост и развитие животных, нормализует функцию печени, повышает неспецифическую резистентность организма, способствует образованию костной ткани. В стрессовых ситуациях бутафосфан нормализует уровень гормона стресса — гидрокортизона, благодаря чему улучшает утилизацию глюкозы в крови и способствует сохранению энергетических ресурсов организма (Martyshuk & Gutyj, 2019).

Витамин В12 (цианокобаламин) играет важную роль в регуляции функции кроветворных органов, участвует в синтезе пуриновых, пиримидиновых оснований, нуклеиновых кислот, необходимых для процесса эритропоэза. Нормальные белковый, жировой и углеводный обмены невозможны без участия витамина В12.

Эффективность комбинации бутафосфана и цианокобаламина исследована и описана в литературе (Kreipe et al., 2011; Nuber et al., 2015; Chalmeh et al.,2020). На рынке присутствуют ветеринарные препараты с комбинацией бутафосфана и цианокобаламина, такие как Катозал (Bayer HealthCare LLC., США), Цианофор (ООО «Ветсинтез», г. Харьков), Ветозал (O.L.KAR., г. Шаргород). Известны также сочетание данной комбинации с карнитином или никотинамидом. Никотинамид (витамин В3, (РР)) стимулирует выработку никотинамидадениндинуклеотидфосфата (НАДФ) и никотинамидадениндинуклеотида (НАД), регулирующего течение большинства окислительно-восстановительных реакций, обеспечивая нормализацию многих видов обмена (включая и энергетический). Этот витамин присутствует в метаболизме жиров, протеинов, аминокислот, пуринов, тканевом дыхании, гликогенолизе. Никотинамид обладает дезинтоксикационным свойством, быстро распределяется в тканях и проходит через плацентарный барьер (Lourens &Benyt, 1991; Nelson & Cox, 2017). L-карнитин (витамин В11) является продуктом биосинтеза лизина и метионина, в организме выполняет ряд важных функций, среди которых: детоксикация, стимуляция метаболические процессов, укрепление сосудов, стимуляция регенерации тканей. Его применение способствует повышению выносливости организма, улучшению работы сердца, увеличению мышечной массы за счет ускорения обменных процессов в клетках, способствует проникновению к клеткам витаминов, минералов и выведению продуктов распада, уменьшению риска возникновения жировой дистрофии печени (Lourens & Benyt, 1991; Nelson & Cox, 2017; Tarasenko et al., 2007).

Научный интерес вызывает исследование эффективности новой комбинации из сбалансированного комплекса активных действующих веществ, таких как бутафосфан, витамин B12, никотинамид (витамин В3) и L-карнитин (витамин В11). Целью нашей работы было изучить терапевтическую эффективность у лошадей препарата L-Цин как тонизирующего средства с оригинальной комбинацией из четырех действующих веществ при условии воздействия различных стресс-факторов: при чрезмерной нагрузке, в составе комплексной терапии заболеваний различной этиологии.

Материал и методы исследований

Клинические испытания препарата проводились в НПЦ «Комарновское» (с. Переможное Городокского района Львовской обл.) на рабочих лошадях в возрасте 5-15 лет разного пола. Лабораторные исследования проводили в лаборатории клинико-биологических исследований ГНИКИ ветпрепаратов и кормовых добавок.

Для решения поставленной задачи были проведены два опыта: первый — исследование эффективности применения препарата L-Цин на лошадях в период интенсивных нагрузок; второй — исследование эффективности применения препарата L-Цин на лошади в составе комплексной терапии при лечении интоксикации с признаками острой почечной недостаточности.

Опыт 1. При клинико-диагностическом обследовании поголовья в хозяйстве было отобрано 5 рабочих лошадей разного пола и возраста. Общее клиническое состояние и упитанность отобранных животных были удовлетворительными.

Взятие образцов крови у исследуемых лошадей проводили до начала применения препарата L-Цин и на 10 сутки после последнего введения препарата. Препарат вводили внутримышечно в дозе 20 мл 1 раз в сутки в течение 5 суток подряд. За клиническим состоянием подопытных животных наблюдали на протяжении 21 суток с начала применения препарата.

Опыт 2. Лечение острой интоксикации у лошади. После проведенного клинического осмотра больной лошади была отобрана кровь из яремной вены для лабораторного исследования. На основании клинических данных и результатов исследования крови врачом был поставлен диагноз — интоксикация с признаками острой почечной недостаточности и было назначено лечение, включающее препараты: обезбаливающего, спазмолитического, противовоспалительного и антигистаминного действия, регидратационную терапию. В состав комплексной терапии с 2 суток лечения также входил исследуемый нами препарат L-Цин в дозе 25 мл внутривенного ввода в течение 5 суток подряд.

Морфо-функциональное состояние организма животных до и после применения препарата устанавливали по клиническому состоянию, морфологическим и биохимическим показателям крови, которые определяли согласно общепринятым методикам (Lapovets et al., 2011; Vlizlo et al., 2012; Kotsiumbas et al., 2014). Для оценки общего состояния и характеристики изменений основных параметров организма животных был подобран ряд лабораторных тестов, отвечающих требованиям к клиническим испытаниям препаратов данной фармакокинетической группы ( European Treaty Series/123; VICH GL9, 2000; Levchenko et al., 2002; Horbatiuk, 2004; VICH GL43, 2008; Lapovets et al., 2011; Kotsiumbas et al., 2013 ). Для морфологических исследований использовали образцы крови лошадей, стабилизированные ЭДТА, а для биохимических исследований — сыворотку крови (СК). Гематологические исследования (количество эритроцитов, лейкоцитов, содержание гемоглобина, гематокрита, эритроцитарные индексы (МСНС, МСV, МСН) проводили с помощью автоматического анализатора Mythic 18 Vet с использованием принципа импедансометрии. Лейкограмму исследовали путем микроскопии мазков крови, окрашенных красителем по Романовскому-Гимзе.

Содержание общего белка, глюкозы, мочевины, креатинина, активность аланинаминотрансферазы (АЛТ), аспартатаминотрансферазы (АСТ), щелочной фосфатазы (ЛФ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ), КФК (УК) в сыворотке крови лошадей определяли с помощью полуавтоматического биохимического анализатора HumaLyzer 3000, с использованием стандартизированных наборов Human Diagnostics Worldwide (Германия).

Полученные результаты обрабатывали статистически, оценивая вероятность разницы показателей (Р < 0,05) по критерию Стьюдента. За статистически достоверный результат принимали разницу между величинами, при которой уровень вероятности разницы (Р) был не более чем 0,05, что является общепринятым подходом в лабораторных исследованиях.

Наличие и степень достоверных различий исследуемых показателей до и после применения препарата свидетельствует о выраженности специфического фармакологического действия препарата (CVMP/EWP/81976/2010).

Результаты и их обсуждение

В первом исследовании обсуждали эффективность применения препарата L-Цин на лошадях в период интенсивных нагрузок. Лабораторными исследованиями перед началом применения препарата установлено, что значения большинства гематологических и биохимических показателей крови были в рамках физиологической нормы для животных данного вида (табл. 1, 2).

Однако количество лейкоцитов было на уровне максимальной физиологической нормы, а активность ЛДГ — выше нормы более чем в два раза. Такая высокая активность энзима, очевидно, является последствием хронических физических нагрузок, поскольку ЛДГ — это фермент углеводного обмена, причем наибольшая его активность наблюдается в скелетных и сердечном мускулах, почках, печени и эритроцитах. ЛДГ катализирует одну из важнейших реакций гликолиза — взаимопревращение пировиноградной и молочной кислот и является важным биохимическим диагностическим тестом для оценки работы мышечной ткани в условиях анаэробного гликолиза при физических нагрузках (Tarasenko et al., 2007; Lapovets et al., 2011; Nelson & Cox, 2017).

На 10 сутки после применения препарата во время анализа гематологических показателей у лошадей отмечали вероятное увеличение, в рамках нормы, содержание гемоглобина на 12% (Р ≤ 0,05), тенденцию к увеличению количества эритроцитов и эозинофилов на 19,4 и 41,9% соответственно по сравнению с показателями до введения препарата (табл. 1).

При анализе биохимических показателей в этот период установлено вероятное повышение в 4,1 раза (Р ≤ 0,05) активности КК (катализирует образование с АТФ и креатина высокоэнергетического соединения креатинфосфата, которое расходуется организмом при увеличенных физических нагрузках), в 1,6 раза (Р ≤ 0,05) активности АсАТ (аминотрансфераза, которая проявляет наибольшую ферментативную активность в сердечной мышце, в значительном количестве присутствует в мышцах опорно-двигательного аппарата и гепатоцитах) и снижение в 1,6 раза (Р ≤ 0,05) активности ЛДГ. Ферменты КК, АсАТ и ЛДГ являются маркерами состояния кардиомиоцитов и миокарда в целом (Tarasenko etal., 2007; Lapovets et al., 2011; Nelson & Cox, 2017).

Вместе с тем в СК проявляли тенденцию к увеличению содержания креатинина и общего билирубина. Показатели содержания глюкозы и мочевины менялись не существенно. Стоит отметить, что колебания всех этих показателей не превышали их физиологической нормы для лошадей (табл. 2).

Таблица 1

Гематологические показатели лошадей при применении препарата L-цин, (М ± m, n = 5)

Показатели

До введения

10 сутки после введения

Физиологические пределы

Гемоглобин, г/л

123,3 ± 2,8

138,3 ± 3,2*

80-160

Эритроциты, Т/л

6,6 ± 0,4

7,4 ± 0,2

5,5-10,0

Гематокрит, %

37,3 ± 2,1

39,8 ± 1,4

24-52

МСН, пг

18,7 ± 0,2

18,4 ± 0,3

10-20

МСНС, г/дл

33,0 ± 0,3

35,4 ± 0,2

20-37

МСУ, мкм3

56,8 ± 2,3

53,1 ± 1,2

35-58

ШОЕ, мм/за 30 мин

22,7 ± 1,8

31,3 ± 1,5

До 107 за 30 мин

мм/за 45 мин

36,3 ± 2,7

41,3 ± 0,9

До 124 за 45 мин

Лейкоциты, Г/л

12,9 ± 0,5

10,4 ± 0,3*

5,5-12,0

Базофилы, %

0

0

0-3

Эозинофилы, %

9,3 ± 0,8

5,4 ± 0,3*

2-12

Нейтрофилы палочнояд., %

4,7 ± 0,9

3,3 ± 0,8

0-6

Нейтрофилы сегментояд., %

42,0 ± 2,8

46,7 ± 1,5

35-75

Лимфоциты, %

42,0 ± 1,5

38,0 ± 1,2

15-50

Моноциты, %

3,0 ± 0,8

5,3 ± 0,9

2-5

Примечание: здесь и далее* Р ≤ 0,05 по сравнению с периодом до применения препарата.

Таблица 2

Биохимические показатели сыворотки крови лошадей при применении препарата L-цин, (М ± m, n = 5)

Показатели

До введения

10 сутки после введения

Физиологические пределы

Общий белок, г/л

71,1 ± 1,4

74,7 ± 1,2

60–78

Общий биллирубин, мкмоль/л

8,9 ± 1,8

17,3 ± 3,2*

7–25

КК, Ед./л

97,5 ± 6,0

404,6 ± 16,9*

90–560

АсАТ, Ед./л

208,0 ± 8,2

328,7 ± 14,1*

50–350

АлАТ, Ед/л

14,0 ± 0,8

13,2 ± 0,6

3–25

ЛДГ, Ед/л

1018,0 ± 182,8

650,0 ± 103,4*

250–500

Мочевина, ммоль/л

5,1 ± 0,7

7,1 ± 0,5

4,15–7,47

Креатинин, мкмоль/л

98,3 ± 14,8

117,8 ± 9,8

106–167

Глюкоза, ммоль/л

5,5 ± 0,6

4,7 ± 0,3

3,1–6,2

На 8-10 сутки после последнего введения препарата клиническое состояние животных улучшилось, лошади стали активней, улучшился аппетит. В течение периода клинического исследования у животных не было зафиксировано случаев заболевания. При применении препаратов и после проведенного лечения проявлений побочных реакций или негативных явлений у лошадей не наблюдалось.

Во втором опыте врачом ветеринарной медицины хозяйства при клиническом обследовании больного животного установлено: нарушение поведенческой реакции, беспокойство, отсутствие аппетита, тремор мышц, брюшная стенка напряжена, болезненна при пальпации, фекалии разжиженной консистенции, мочеотделение уменьшено. Процесс развивался в острой форме. Температура тела животного колебалась в пределах 36,0-36,5 °С, частота дыхания составляла 18 дых. движений/мин, пульс — 40 ударов в минуту.

За клиническим состоянием животных проводили постоянное наблюдение. Улучшение клинического состояния выявляли на 3 сутки лечения. Клинические симптомы заболевания исчезали на 7-8 сутки.

Анализируя результаты морфологических и биохимических показателей, у больной лошади обнаружили увеличение количества лейкоцитов, в лейкограмме — увеличение процента палочкоядерных нейтрофилов и уменьшение количества эритроцитов (табл. 3).

Таблица 3

Результаты морфологических и биохимических исследований больной лошади

Показатели

До введения

10 сутки после введения

Физиологические пределы

Показатели

Эритроциты Т/л

5,1

6,3

6,3

5,5-10

Гемоглобин Г/л

100

100

118

80-160

Лейкоциты Г/л

18,4

8,6

8,5

5,5-12,0

Эозинофилы, %

7

2

4

2-12

Базофилы, %

0

0

0

0-3

Нейтрофилы палочкоядерные, %

12

7

4

0-6

Нейтрофилы сегментоядерные, %

68

69

48

35-75

Лимфоциты, %

5

15

38

15-50

Моноциты, %

8

7

6

2-5

Общий белок, г/л

116,3

74,4

70,2

60-78

Альбумин, г/л

54,3

35,1

38,5

29-59

Общий биллирубин, мкммоль/л

15,0

25,7

18,9

7-25

ЛФ, Ед/л

626,8

428,3

317,9

100-300

АсАТ, Ед/л

622,1

635,7

327,1

50-350

АлАТ, Ед/л

62,29

48,4

24,3

3-25

ЛДГ, Ед/л

495,3

381,7

348,9

250-500

Мочевина, ммоль/л

24,8

6,0

6,3

4,1-7,5

Креатинин, ммол/л

515,7

93,8

105,4

106-167

Об. холестерол,

30,6

5,9

3,2

1,3-2,8

Глюкоза, ммоль/л

4,2

4,9

5,5

3,1-6,2

Кальций, ммоль/л

1,3

2,5

2,4

2,2-3,1

Фосфор, ммоль/л

5,2

1,5

1,3

1,1-1,9

При анализе биохимических показателей у СК установлено увеличение содержания общего белка, мочевины, креатинина, общего холестерина и фосфора на фоне уменьшения содержания кальция, также значительное повышение активности аминотрансаминаз и ЛФ. Нормализация показателей крови больного животного произошла на 10 сутки с начала лечения (таб. 3).

Таким образом, по результатам проведенного лечения можно сделать вывод, что в составе комплексной терапии при лечении интоксикации у лошади применение препарата L-Цин способствовало улучшению клинического состояния, нормализации морфофункциональных показателей организма.

Выводы

При чрезмерной нагрузке у рабочих лошадей препарат L-Цин, раствор для инъекций, проявлял терапевтическую эффективность: активировал процессы кровообразования, улучшал показатели физиологического состояния организма и способствовал повышению общего тонуса организма. Препарат не проявил неожиданного негативного местного или общего действия.

Применение препарата L-Цин на лошади в составе комплексной терапии при лечении интоксикации способствовало быстрому улучшению клинического состояния и нормализации морфофункциональных показателей организма. Препарат выявлял гепато- и нефропротекторные качества, понижал проявления интоксикации, способствовал возобновлению нормального физиологического состояния животного.

Внедрение в клиническую ветеринарную практику лекарственного средства L-Цин обусловит расширение перечня препаратов данной группы, даст возможность практичным врачам ветеринарной медицины применять его в качестве как монотерапии, так и для комплексного лечения заболеваний различной этиологии у животных.

Полный текст статьи опубликован в научном вестнике ЛНУВМБ имени С. З. Гжицкого. Серия: Ветеринарные науки, 2021, Т.. 23, №101.

Скачать PDF-версию и список литературы