ТЕСТ-СИСТЕМА

для диагностики болезни Ауески
«ИФА gB-BБA» in vitro

ТЕСТ-СИСТЕМА

для диагностики болезни Ауески «ИФА gB-BБA» in vitro

Свиноводство
ТЕСТ-СИСТЕМА

Ваше сообщение отправлено

Состав

  • Планшет для ИФА с иммобилизованным инактивированным антигеном ВБА – 2 шт.;
  • Концентрат (10х) раствора № 1 для промывания планшетов – 2 флакона по 50 мл;
  • Концентрат раствора конъюгата пероксидазного моноклонального анти-gЕ – 1 флакон 0,5 мл;
  • Раствор № 2 для разведения анти-gE-конъюгата и сывороток – 2 флакона по 30 мл;
  • Положительная контрольная сыворотка, содержащая анти-gЕ-антитела (К+) – 1 флакон 1,5 мл;
  • Отрицательная контрольная сыворотка, не содержащая анти-gЕ-антитела (К-) – 1 флакон 1,5 мл;
  • Раствор хромогена (тетраметилбензидин, ТМБ) с перекисью водорода (раствор № 3) – 1 флакон 30 мл;
  • Раствор № 4 для остановки реакции – 2 флакона по 30 мл.

целевые животные

Свиньи всех возрастных категорий.

Показания к применению

Применяют для определения инфицированных вирусом болезни Ауески свиней среди невакцинированного поголовья и среди поголовья, вакцинированного gE- отрицательной вакциной против болезни Ауески.

Противопоказания

Тест-систему не применяют для диагностики болезни Ауески у свиней, вакцинированных немаркированной gE-положительной вакциной против болезни Ауески.

Способ применения и дозы

1. Приготовление реагентов (для проведения анализа на одном планшете).

1.1. Раствор № 1 для промывания планшетов.

Для приготовления раствора для промывания планшетов (рабочего) раствор № 1 (10-кратный концентрат) интенсивно взбалтывают, разводят в соотношении 1:10 дистиллированной или деионизированной водой и еще раз взбалтывают. Если в концентрате выпал осадок из кристаллов, то его подогревают перед использованием при температуре 37°С до полного их растворения. (Например: для приготовления раствора для промывания 1 планшета необходимо смешать 50 мл раствора № 1 с 450 мл воды). Срок хранения раствора – 24 часа при температуре +4° С.

1.2. Раствор анти-gЕ-конъюгата.

Для приготовления рабочего раствора из расчета на 1 планшет следует 10 мл раствора № 2 перенести в отдельную пробирку и добавить 0,2 мл концентрата раствора aнти-gЕ-конъюгата до получения конечного разведения в рабочем растворе 1:50. Полученный раствор следует тщательно перемешать. Срок хранения раствора – 24 часа при температуре 4° С.

1.3. Раствор ТМБ с перекисью водорода (раствор № 3) и раствор № 4 для остановки реакции поставляется в готовом виде. Срок хранения растворов ограничен сроком годности тест-системы.

ВНиМАНиЕ!

аствор № 4 для остановки реакции (2 % раствор серной кислоты) может вызвать химические ожоги в случае попадания на кожу.

2. Образцы сывороток.

2.1. Для анализа необходимо 50 мкл сыворотки или плазмы крови свиней на каждую лунку планшета. Для увеличения точности анализа необходимо исследовать каждую сыворотку дважды.

2.2. Для тестирования используют свежую или замороженную до минус 20° С сыворотку (плазму) крови. Сыворотку (плазму), подвергаемую тестированию, хранят при 4° С не более 48 часов. Сыворотки, контаминированные микрофлорой, а также сыворотки, содержащие осадок, не исследуют.

2.3. Контрольные сыворотки (К+, К-) тестируют аналогично исследуемым сывороткам. Контрольные сыворотки хранят при температуре 4°С. Срок хранения контрольных сывороток ограничен сроком годности тест-системы.

3. Проведение анализа.

Перед использованием все реагенты тест-системы и сыворотки доводят до комнатной температуры и взбалтывают.

3.1. Переносят необходимое количество раствора № 2 из флакона в одноразовую ванночку. При помощи многоканальной автоматической пипетки вносят в лунки планшета с иммобилизованным антигеном ВБА по 50 мкл раствора № 2.

3.2. При помощи одноканальной автоматической пипетки вносят в соответствующие лунки планшета по 50 мкл контрольных сывороток (К+, К-). (Отрицательную контрольную сыворотку вносят в две лунки – А1, В1. Положительную контрольную сыворотку вносят в две лунки – С1 и D1). Контрольные сыворотки следует тщательно перемешать в лунке в растворе № 2 трехразовым пипетированием, не касаясь дна и стенок лунок и не допуская появления пузырьков.

3.3. При помощи одноканальной пипетки вносят в лунки планшета по 50 мкл исследуемых сывороток и тщательно перемешивают в растворе № 2 трехразовым пипетированием, не касаясь дна и стенок лунок и не допуская появления пузырьков.

ВНиМАНиЕ! Перед использованием все сыворотки тщательно перемешивают. Каждый образец сывороток отбирают отдельным наконечником.

3.4. Накрывают планшет крышкой или клейкой бумагой и инкубируют его в термостате при 37° С 2 часа.

3.5. Промывают планшет раствором для промывания планшета (рабочим) 4-5 раз. При промывании в каждую лунку вносят не менее 0,3 мл раствора для промывания. После промывания из лунок тщательно удаляют влагу, постукивая планшетом по фильтровальной бумаге.

3.6. Переносят необходимое количество раствора анти-gЕ-конъюгата (рабочего) из флакона в одноразовую ванночку. При помощи многоканальной автоматической пипетки во все лунки вносят по 0,1 мл раствора aнти-gЕ- конъюгата.

3.7. Накрывают планшет крышкой и инкубируют в термостате при 37° С 1 час.

3.8. Планшет промывают пять раз и удаляют влагу.

3.9. Переносят необходимое количество раствора хромогена (№ 3) путем переливания из флакона в одноразовую ванночку. При помощи многоканальной автоматической пипетки вносят в лунки по 0,1 мл раствора ТМБ с перекисью водорода (раствор № 3).

ВНиМАНиЕ!

Посуду, которую использовали для работы с ТМБ, необходимо тщательно вымыть. Раствор ТМБ не должен контактировать с металлами, а также подвергаться действию прямых солнечных лучей.

3.10. Планшет помещают в защищенном от прямых солнечных лучей месте при температуре от 21 до 24° С на 15 минут.

3.11. Ферментативную реакцию останавливают путем внесения в лунки автоматической многоканальной пипеткой по 0,1 мл раствора № 4 (для остановки реакции). Раствор №4 добавляют в лунки в той же последовательности, что и раствор ТМБ.

3.12. Учет результатов проводят не позднее 15 минут после остановки реакции. Измеряют оптическую плотность при 450 нм в лунках с помощью многоканального спектрофотометра. Нулевой уровень спектрофотометра устанавливают по воздуху.

ВНиМАНиЕ!

На всех этапах анализа не допускают подсыхания поверхности лунок отмытых планшетов. Для этого быстро вносят следующие реагенты в отмытые лунки.

ВНиМАНиЕ!

На всех этапах инкубации и при спектрофотометрии планшета раствор в лунках не должен содержать пузырьки.

4. Учет и интерпретация результатов анализа.

4.1. Среднее значение оптической плотности отрицательной контрольной сыворотки (ОПк-) рассчитывают по соответствующим показателями в двух лунках по формуле:
ОПк- = ОПА1 + ОПВ1 / 2

4.2. Среднее значение оптической плотности положительной контрольной сыворотки (ОПк+) рассчитывают по соответствующим показателям в двух лунках по формуле:
ОПк+ = ОПC1 + ОПD1 / 2

4.3. Если анализ исследуемых сывороток сделан дважды, то для каждой из них определяют среднее значение оптической плотности исследуемой сыворотки (ОП иссл. сывор.) по формуле:
ОП иссл. сывор. =ОП1 + ОП2 / 2

4.4. Процент блокирования оптической плотности положительной контрольной сыворотки (% блокирования К+) рассчитывают по формуле:
% блокирования К+ = (ОПк- – ОПк+ / ОПк-) х 100%

4.5. Процент блокирования оптической плотности исследуемой сыворотки (% блокирования иссл.сывор.) рассчитывают по формуле:
% блокирования иссл. сывор. = (ОПк- – ОП иссл. сывор. / ОПк-) х 100%

4.6. Проведение анализа является корректным, если значение ОПк- находится в пределах 0,7-2,3, а процент блокирования К+ превышает или равен 70%. Если значение ОПк- находится за пределами 0,7-2,3 или процент блокирования К+ ниже 70%, то результаты анализа считают недостоверными и исследуют сыворотки повторно.

4.7. Результаты тестирования являются положительными, то есть в сыворотках присутствуют антитела к gЕ ВБА, если процент блокирования исследуемой сыворотки (% блокирования иссл. сывор.) больше или равен 50%. Положительный результат свидетельствует об инфицировании свиней «полевыми» штаммами ВБА или о вакцинации животных немаркированными (gЕ-положительными) вакцинами против болезни Ауески. Сыворотки, дающие положительные результаты, рекомендуют повторно исследовать на наличие антител к gЕ.

4.8. Результаты тестирования являются отрицательными (в сыворотках отсутствуют антитела к gЕ ВБА), если процент блокирования исследуемой сыворотки (% блокирования иссл.сывор.) меньше 40%. Анти-gЕ антитела отсутствуют в сыворотках крови неинфицированных невакцинированных свиней или неинфицированных свиней, вакцинированных gE-отрицательной маркированной вакциной против болезни Ауески.

4.9. Результаты тестирования сыворотки являются сомнительными, если процент блокирования исследуемой сыворотки (% блокирования иссл.сывор.) больше или равен 40 % или меньше 50 %. Сыворотки, которые дают сомнительные результаты, повторно исследуют на наличие антител к gЕ. Если сомнительные результаты получают в повторном исследовании, то следует отобрать новые пробы сывороток крови у животных и исследовать их при помощи тест-системы «ИФА gЕ-BБA».

Срок годности

8 месяцев. После разведения или растворения компоненты тест-системы годны в течение 24-х часов.

Условия хранения

Хранить в сухом, темном, недоступном для детей месте при температуре от 2 до 8° С.

Публикации о продукте

Хвороба Ауєскі: чи варто звертати увагу?

Хвороба Ауєскі: чи варто звертати увагу?
Вперше клінічні ознаки хвороби Ауєскі були описані 1813 року у ВРХ, а 1849 року в зв’язку з характерними клінічними особливостями захворювання було названо як «псевдосказ». 1902 року угорський вчений…
22.10.2015
905